武汉科锐诺生物科技有限公司

分子病理技术服务-科锐诺(在线咨询)

武汉科锐诺生物科技有限公司

  • 主营产品:外泌体,透射电镜,扫描电镜,石蜡切片等技术服务
  • 公司地址:湖北省武汉市江夏区神墩四路666号武汉国英种子A栋1楼
咨询热线: 18627856353
立即咨询 QQ咨询
信息详情

1,组化

实验原理:组化(IHC),是应用抗原与特异性结合的原理,通过酶标与底物反应显色,从而对组织细胞内抗原进行定位、定性及定量的研究,称为组织化学技术。组化(IHC)具有特异性强、敏感度高、定位准确的优点。

1, 荧光

实验原理:荧光(IF),是应用抗原与特异性结合的原理,通过荧光标记对组织细胞内抗原进行定位、定性及定量的研究。目前皮诺飞生物主要可以对石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片、组织芯片进行荧光检测。皮诺飞生物目前已突破传统的荧光双标限制,开发出多色荧光技术(多可达7色)。









将少数菌落转移到纤维素滤膜上

(1) 在含有选择性的琼脂平板上放一张纤维素滤膜。

(2) 用无菌牙签将各个菌落先转移至滤膜上,再转移至含有选择性但未放滤膜的琼脂主平板上。应按一定的格子进行划线接种(或打点)。每菌落应分别划线于两个平板的相同位置上。后,在滤膜和主平板上同时划一个含有非重组质粒的菌落。

(3) 倒置平板,于37℃培养至划线的细菌菌落生长到0.5-1.0mm的宽度。

(4) 用已装防水黑色绘图墨水的针头穿透滤膜直至琼脂,在3个以上的不对称位置作标记。在主平板大致相同的位置上也作上标记。

(5) 用Parafilm膜封好主平板,倒置贮放于4℃,直至获得杂交反应的结果。

(6) 裂解细菌,按本段下面所述方法,使释放的DNA结合于纤维素滤膜。


.杂交 (1) 盛有2×SSC的塑料盘同,将干烤的滤膜飘浮在液面上,浸湿5分钟。(2) 将滤膜转到200ml预洗液的玻璃皿中。滤膜何叠在一起,放于溶液中。用保鲜膜盖住玻璃皿,放到位于培养箱内的旋转平台上。于50℃处理30分钟。在这一步及以后的所有步骤中,应缓缓摇动滤膜,防止它们粘在一起。(3) 用泡过预洗液的吸水棉纸轻轻地从膜表面拭去细菌碎片,以降低杂交背景而不影响阳性杂交信号的强度和清晰度。(4) 将滤膜转到盛有150ml预杂交液的玻璃中,在适宜温度(即在水溶液中杂交时用68℃,而在50%甲酰胺中杂交时用42℃)下,预杂交1-2小时。(5) 将32 P标记的双链DNA探针于100℃加热5分钟,迅速置于冰浴中。单链探针不必变性。将探针加到杂交袋中杂交过夜。杂交期间,盛滤膜的容器应盖严,以防液体蒸发。